در این تحقیق از روش مولکولی Real Time PCR برای اندازه گیری کپک رایزوپوس اوریزا در رب گوجه فرنگی استفاده شد.به دلیل مشکلات روش شمارش کپک­ها به روش شماره نسبی کپک­ها از قبیل احتمال خطای آزمون کننده، دقت کم و عدم تکرار پذیری، تبیین یک روش استاندارد که بتواند با دقت و تکرار پذیری بالا تشخیص و شمارش کپک­ها را امکان پذیر سازد ضروری به نظر می­ رسد. روش مولکولی Real Time PCRمی ­تواند به عنوان یک روش مناسب برای شناسایی و اندازه­ گیری کمی دقیق کپک­ها مطرح باشد که بر مبنای اندازه ­گیری مطلق و نسبی ژن­های کپک­های موجود می­ باشد. نمونه های رب گوجه فرنگی با مقادیر مختلف اسپور کپک (101، 103 و 105) در هر گرم آلوده شد. پس از گرمخانه گذاری و رشد اسپور کپک و ایجاد میسیلیوم استخراج DNAاز هر نمونه با استفاده از روش السامرایی انجام شد. سپس با استفاده از واکنش PCRتعداد کپی DNAکپک با استفاده از شناساگر سایبرگرین و پرایمرهای مربوط به جنس رایزوپوس اوریزا تعیین شد. نتایج نشان داد که با افزایش مقدار DNAکپک در نمونه های شاهد و تلقیح شده منحنی Real Time PCRدر مقادیر CTکمتری به فاز لگاریتمی وارد می شوند. ضریب همبستگی خطی منحنی استاندارد در آزمونPCR Real Time(943/0=R2)بود که نشان دهنده­ ی دقت تعیین کمی این آزمون می باشد. اختصاصی بودن واکنش با استفاده از منحنی ذوب پرایمرها تعیین شد و نشان داد که واکنش به طور کاملا اختصاصی انجام شده است

کلمات کلیدی