Title : ( The identification of single strand DNA aptamers which specifically bind to platelets using cell-SELEX technique )
Authors: َّّFATEMEH ALEMI , Mojtaba Sankian , Alireza Haghparast , GHOLAMREZA HASHEMI TABAR ,
دانلود فایل برای اعضای دانشگاهAccess to full-text not allowed by authors
Abstract
زمینه: آپتامرها اولیگونوکلئوتیدهایی از جنس RNA یا DNA هستند که براساس اتصال اختصاصی به مولکوول یا سلول هدف، انتخاب و بوسیله PCR تکثیر داده می شوند. پلاکت های خون سلول های بدون هسته ای هسوتند که در انسداد فوری بریدگی های رگی و حفظ خون در داخل رگ ها نقش اساسوی ایفوا موی کننود و اخوتلال در عملکرد آنها منجر به بیماری های متنوع انعقادی می گردد. ههد ف: هودف از ایون مطالعوه، شناسوایی و تعیوین خصوصیات آپتامرهای اختصاصی پلاکت ها موی باشود. روش تمقی هق: کتابخانوه اولیگونوکلئوتیودی حواوی 38 نوکلئوتید تصادفی )در وسط( و دو ناحیه ثابت )در طرفین( خریداری و بوا پلاکوت هوای انسوانی تخلوید شوده مجاور گردید. اولیگونوکلئوتیدهایی که با نیروی اتصالی قوی به پلاکت ها متصل شده بودند انتخاب شوده و طوی 13 مرحله روند Cell-SELEX تکثیر داده شدند، محصول هر مرحله از SELEX به روش فلوسایتومتری ارزیابی شد. محصوول PCR نهوایی بوه وکتوور pTG19-T منتقول شوده و در سوویه E.Coli TOP10 ترانسوفورم شود. شناسایی شده و پس از تکثیر باکتری و تخلید پلاسمید، تووالی آپتوامر در » پلاسمید+آپتامر « کلنی های حاوی تعدادی از آنها تعیین گردید. خصوصیات اتصالی آپتامر ) Affinity/Specificity ( تعیین و اثردمای انکوباسویون و آنزیم تریپسین بر اتصال آپتامر ارزیابی گردید. همچنین، اثر آپتامر بر عملکرد پلاکت ها از طریق دو تست LTA و PFA-100 بررسی گردید. نتایج: روند سلکس در مرحله 11 به حد نهایی رسید. پس از همسانه سازی، توالی 200 اپتوامر تعیوین شوده و آپتامرها براساس همترازی دسته بندی شدند. خصوصیات آپتامرهای نمونه از هفت دسته بررسی شود. افینیتوی آپتامرهای منتخب بین 339 - 109 نانومول محاسبه گردید. ویژگی آنها 100 % بود. تیمار پلاکت ها با تریپسوین ، قبل از اتصال آپتامرها، منجر به کاهش شدید اتصال آپتامر به لیگاند خود شد. اتصال آپتامرهای A001, A002, A003, A007 سبب محافظت لیگاند در مقابل عمل هضمی تریپسین گردید. همچنین، هیچیک از هفت آپتوامر منتخب بر عملکرد انعقادی پلاکت ها )تست های LTA و PFA-100 ( تاثیری نداشتند. بحث: آپتامرها مولکول های کوچکی هستند که همانند آنتی بادی ها در اتصال به مولکول های هدف خود، ویژگوی بالایی را نشان می دهند و در کاربردهای تشخیصوی و درموانی رقیوب کارآمودی بورای آنتوی بوادی هوا محسووب می شوند. ما در این تحقیق آپتامرهایی از جنس DNA را که توان اتصالی بالایی به پلاکت ها داشوتند شناسوایی کردیم. این آپتامرها اختصاصی پلاکت عمل کرده و گرایشی برای اتصوال بوه لکوسویت هوا و گلبوول هوای قرموز نداشتند. لیگاندهای هفت آپتامر منتخب در سطح پلاکت ها از جنس پروتئین بوده و در اثر تیموار بوا تریپسوین تخریب شدند. شناسایی توالی آمینواسیدی و عملکرد این مولکول های غشایی موجود بر سطح پلاکت ها موضووع طرح های تحقیقاتی آتی می باشد.
Keywords
, اپتامر, پلاکت های خون؛, SELEX , فلوسایتومتری
@article{paperid:1087310,
author = {ALEMI, َّّFATEMEH and Mojtaba Sankian and Haghparast, Alireza and HASHEMI TABAR, GHOLAMREZA},
title = {The identification of single strand DNA aptamers which specifically bind to platelets using cell-SELEX technique},
journal = {Iranian Journal of Veterinary Science and Technology},
year = {2021},
month = {November},
issn = {2008-465X},
keywords = {اپتامر، پلاکت های خون؛، SELEX ، فلوسایتومتری},
}
%0 Journal Article
%T The identification of single strand DNA aptamers which specifically bind to platelets using cell-SELEX technique
%A ALEMI, َّّFATEMEH
%A Mojtaba Sankian
%A Haghparast, Alireza
%A HASHEMI TABAR, GHOLAMREZA
%J Iranian Journal of Veterinary Science and Technology
%@ 2008-465X
%D 2021
