توفاژی، ترکیبات و اندامکهای آسیبدیده درون وزیکول دو غشایی به نام اتوفاگوزوم قرار میگیرند و به سمت واکوئل هدایت میشوند تا توسط آنزیمهایهیدرولیتیکیواکوئل تخریب و به مواد اولیه تجزیه شوند. پروتئینATG8مشخصهمسیر اتوفاژی است که در شکلگیری اتوفاگوزوم و قرارگیری محمولههای هدف برای تخریبشدن درون اتوفاگوزوم نقش دارد.در مسیر اتوفاژی انتخابی، حضور پذیرندةمحموله برای قرارگیری محموله درون اتوفاگوزوم نقش مهمی ایفا میکند. پذیرندهها دارای موتیف اتصال بهATG8به نامAIMیاLIRهستند که میتوانند بادمینLDSکه جایگاه اتصالAIM/LIRدرATG8است،میانکنش دهند. هرگونه تغییر در جایگاهLDSو یا موتیفAIM، سبب برهم خوردن میانکنشATG8و پذیرنده میشود. در تحقیق حاضر، گیاهMarchantia polymorphaباATG8Bجهشیافته در جایگاهLDSاز طریق جهش هدفمند در محل،ایجادشدند تا برای مطالعات آتی برای شناسایی پذیرندههای احتمالی مورد استفاده قرار گیرند. بدین منظور از طریق بلاست پروتئینی،توالی پروتئین ATG8Bدر گیاه مارکانتیا در پایگاه اطلاعاتیMarchantia.infoشناسایی شد. از طریق همردیفی پروتئینهایATG8Aاز گیاه آرابیدوپسیس باATG8Bگیاه مارکانتیا،اسیدآمینههایی که در تاخوردگیATG8و شکلگیریجایگاهLDSنقش دارند، شناسایی شدند. دوآمینواسید لیزین۵1و آرژنین۷0، جداگانهبا روش جهش هدفمند در محل با آمینواسید آلانین جایگزین شدند. سپس پروتئین فلورسنتGFPبا کمک فناوری گرینگیت به پروتئین جهشیافتةATG8B اتصال یافت. بهمنظور حفظ شرایط یکسان با گیاهان حاوی ژنATG8Bوحشی موجود در آزمایشگاه، با طراحی آغازگرهای سازگار با گیتوی، پروتئینهای جهش یافته درون سازةبیانی pMpGWB303واردو پس از انتقال به اگروباکتریسویةGWB303+pSOUPبه گیاه انتقال داده شد.بررسی گیاهانتراریخته در آزمایشات وسترن بلات نشان دادکه تنها فرم تغییر یافتة لیزین به آدنین قابلیت بیان شدن و تشکیل پروتئین پایدار را دارد، در حالیکه با تغییر آرژنین به آلانین، پروتئین پایداری خود را از دست داده و قابلیت بیان ندارد

کلمات کلیدی