عنوان : ( بیان و تخلیص آنزیم Cas9 در باکتری coli. E )
نویسندگان: علی امامی پور , هومن رضائی نیک , علیرضا سیفی ,
Full Textچکیده
ویرایش ژنوم مبتنی بر فناوری Cas9/CRISPR( کریسپر( به عنوان ابزار قدرتمندی برای اصالح گیاهان زراعی بهسرعت در حال گسترش است. یکی از مزایای این فناوری امکان دستورزی ژنهای هدف بدون درج DNA خارجی در گیاه است. برای این منظور نیاز است که آنزیم Cas9 و RNA راهنما بصورت کمپلکس پروتئین-RNA( RNP )به سلول گیاهی منتقل شوند. از اینرو تولید Cas9 در آزمایشگاه مقدمه آزمایشات کریسپر مبتنی بر RNP است. هدف این پروژه بیان و تخلیص آنزیم Cas9 در باکتری coli. E بود. در این پژوهش ژن Cas9 در ناقل بیانی pBADM30 کلون و به باکتری coli. E سویهی CodonPlus منتقل شد. نتایج حاصل از کلونی PCR و هضم دوگانهی آنزیمی وجود ژن Cas9 در ناقل pBADM30 را تایید نمود. در مرحله بعد بیان Cas9 با اعمال 2/1 درصد Arabinose-L القا شد و سپس آنزیم Cas9 با استفاده از ستون میل ترکیبی نیکل از کل پروتئین محلول تخلیص شد. الکتروفورز PAGE-SDS حضور پروتئین Cas9 با وزن ملکولی حدود kDa 180 در پروتئین کل و پروتئین تخلیص شده را نشان داد. با توجه به نتایج به دست آمده میتوان گفت که پس از سنجش فعالیت کاتالیکی آنزیم Cas9 تخلیص شده میتوان از این آنزیم به همراه RNA راهنما برای سرهمبندی کمپلکس RNP و انتقال آن به گیاه با روش پروتوپالست یا الکتروپوریشن، برای ویرایش ژنوم استفاده کرد.
کلمات کلیدی
پروتوپالست ریبونوکلئوپروتئین کریسپر ویرایش ژنوم RNP
@article{paperid:1094270,
author = {امامی پور, علی and رضائی نیک, هومن and سیفی, علیرضا},
title = {بیان و تخلیص آنزیم Cas9 در باکتری coli. E},
journal = {ژنتیک نوین},
year = {2023},
volume = {4},
month = {January},
issn = {2008-4439},
pages = {463--470},
numpages = {7},
keywords = {پروتوپالست
ریبونوکلئوپروتئین
کریسپر
ویرایش ژنوم
RNP},
}
%0 Journal Article
%T بیان و تخلیص آنزیم Cas9 در باکتری coli. E
%A امامی پور, علی
%A رضائی نیک, هومن
%A سیفی, علیرضا
%J ژنتیک نوین
%@ 2008-4439
%D 2023
