کنترل دقیق بیان ژن توسط پروموتر نقش مهمی در پیشبرد برنامه های اصلاحی تولید ارقام مقاوم ایفا می کند. یک پروموتر مناسب برای بیان ژن مقاومت باید دارای ویژگ یهائی باشد که از آن جمله م یتوان به عملکرد در زمان و به میزان مناسب، در پاسخ به طیف وسیعی از بیمارگرها اشاره کرد. ساخت پروموترهای مصنوعی بعنوان یک استراتژی بسیار انعطاف پذیر برای بیان تراژن مورد توجه می باشد. پروموترهای مصنوعی با اتصال ساخته می شوند. در این مطالعه بمنظور ساخت پروموترهای القاء شونده توسط minimal promoter به یک توالی cis-acting المنت های باکس بعنوان المنتهای بالقوه القاء شونده توسط پاتوژنها انتخاب شدند. توالیهای D و E17 ، F شامل المنت های cis-acting پاتوژنها سه المنت کلون گردید و سازه های مورد نظر ساخته شدند که minimal promoter دو نسخه ای و ترکیبی از المنت های انتخاب شده در بالادست توالی را در برداشتند. بمنظور بررسی عملکرد پروموترها ابتدا پتانسیل SP-DDEE و SP-FFEE ،SP-FFDD ،SP-EE ،SP-FF پروموتر های در گیاهان کلزا، GUS برای آنالیز بیان پروموترها در گیاه کلزا مورد بررسی قرار گرفت. در این آزمایشات بیان ژن agroinjection تکنیک قابل مشاهده می GUS نشان داد که در برگ توتون و بافت غلاف لوبیا بیان ژن agroinjection توتون و لوبیا مورد مقایسه قرار گرفت. نتایج در برگ کلزا امکان پذیرمی باشد. نتایج GUS نیز نشان داده شد که به بیان ژن particle delivery system باشد. با استفاده از تکنیک Sclerotinia هیستوشیمیائی مربوط به این پروموترها نشان داد که پروموترهای مورد استفاده در پاسخ به آلودگی مستقیم با قارچهای سطح بیان و القاء پذیری متفاوتی نشان دادند. در این مطالعه Fusarium graminearum و Rhizoctonia solani ، sclerotiorum عملکرد پروموترها در پاسخ به تیمارهای کیتین، سالیسیلیک اسید و متیل جاسمونات نیز مورد بررسی قرار گرفت. نتایج به دست آمده در این مطالعه مورد بحث و بررسی قرار می گیرد. Defined gene expression using promoter plays a critical role in progress of a plant breeding program to produce a pathogen resistant variety. An ideal promoter should rapidly and strongly direct expression of resistance gene in interaction with wide range of plant pathogens. Synthetic promoter has been considered as a very flexible strategy for expressing the transgenes. The synthetic promoters were constructed using combining of some cis-acting elements with a minimal promoter sequence. In this study, to construct the pathogen-inducible promoters, three cis-acting elements, as the putative pathogen-inducible elements, were selected, and their functions were investigated in response to a general elicitor, two defense phytohormones, fungal pathogen elicitors and environmental factors. The synthetic promoter approach was used in this study to construct the dimerized and combined cis-acting elements upstream of minimal CaMV 35S promoter. The created constructs contain SP-FF, SP-EE, SP-FFDD, SP-FFEE and SP-DDEE promoters. The ability of agroinjection technique for transient gene expression analysis in canola has been evaluated using created vectors. Using this thacnique expression of GUS in canola, tobacco and bean have been compared. The axpression ability of the constructed vectors in canola leaves have been shown using particle delivery system. The transient expression results revealed that the constructs are able to direct GUS expression in the leaves of canola and bean. The histochemical assay experiment on stably transformed canola revealed that the responssivness of the promoters in reaction to infection of Sclerotinia sclerotiorum, Rhizoctonia solani and Fusarium graminearum pathogens are different. Fluorometric experiments showed that the cell wall released material of the fungus are able to induce the promoters.

کلمات کلیدی