روش اگرواینجکشن به دلیل سهولت و عدم نیاز به امکانات و ابزار خاص در آزمایشات بیان موقت ترانس ژن کاربرد دارد. در این روش از سیستم خلاء و یا تزریق برای نفوذ اگروباکتریوم به درون بافت گیاه میزبان استفاده می شود. روش تزریقی این امکان را می دهد تا بیان ترانس‌ژن و یا پروموتر در برگ‌های متصل به گیاه هدف مورد بررسی قرار گیرد که بخصوص در آنالیز پروموترهای القائی بسیار مفید است. با این روش می‌توان عملکرد پروموترها را درگیاه زنده مورد بررسی قرار داد. در این مطالعه بمنظور بهینه‌سازی شرایط بیان موقت ترانس‌‍ژن اثر عوامل مختلف از جمله گونه گیاهی، مرحله رشدی گیاه، سن برگ، مناطق مختلف پهنک برگ، تعداد روز بعد از تزریق، محیط کشت باکتری، مقادیر ساکاروز، BAP، Tween و Acetosyringone، غلظت باکتری در محلول تزریق مورد بررسی قرار گرفت. در این آزمایش از ناقل pCAMBIA3301 حامل ژن GUS اینترون‌دار تحت کنترل پروموتر CaM35S و سویه LBA4404 اگروباکتریوم استفاده شد. اثرات هر فاکتور در سه تکرار آزمایشی و سه تکرار بیولوژیکی بررسی شد. نمونه‌ها پس از تزریق در شرایط خاص نگهداری شدند و در زمان‌های تعیین شده از محل تزریق یک دیسک تهیه و با استفاده از محلول Xgluc رنگ آمیزی انجام شد. میزان بیان ژن GUS بعد از حذف کلروفیل مورد مقایسه قرار گرفت. نتایج نشان داد بیان ژن GUS در گیاهان مختلف متفاوت است بطوریکه در برگ توتون و غلاف لوبیا میزان بیان بالا بود در حالیکه در برگ ماش تنها به محل تزریق محدود بود. در برگ کلزا تنها در بعضی از نمونه‌ها بیان محدودی در حاشیه بافت آوندی مشاهده شد. در حالیکه در برگ گوجه فرنگی، هندوانه، لوبیا بیان ژن GUS قابل مشاهده نبود. این نتایج نشان داد که گونه گیاهی بیشترین تأثیر را در میزان بیان داشته و همچنین سن برگ و منطقه تزریق نیز در میزان بیان ژن گزارشگر تاثیر به سزائی دارد بطوریکه منطقه میانی برگ های جوان بیان بالاتری را نشان دادند. در مجموع بنظر می‌رسد اثر متقابل گونه گیاهی و سویه باکتری نقش اصلی را در درصد ترانسفورمیشن سلول‌های منطقه تزریق داشته باشد. نتایج این تحقیق جهت آنالیز پروموترهای القائی گیاهی مورد استفاده قرار می‌گیرد.

کلمات کلیدی