لپتین یک هورمون پروتئینی با وزن مولکولی 16 کیلودالتون است که به طور عمده توسط بافت چربی سنتز می شود. با توجه به نقش لپتین در تنظیم اشتها، میزان بافت چربی و ترکیب بدن استفاده از آن در سرعت بخشیدن به میزان رشد و کاهش میزان چربی لاشه گوسفند مدنظر است. از آنجایی که رسیدن به هدف مطلوب مستلزم شناسایی بافت (های) هدف این هورمون و در حقیقت گیرنده (های) آن می باشد لذا در این مطالعه بیان رونوشت (mRNA) گیرنده عملکردی لپتین با روش رونوشت برداری معکوس و واکنش زنجیره ای پلیمراز (RT-PCR) مورد بررسی قرار گرفت. نمونه بافت کبد در کشتارگاه تهیه و در کنار یخ به آزمایشگاه منتقل گردید و تا زمان استخراج RNA در فریزر ˚C 80- نگهداری گردید. سپس با استفاده از محلول TRipure، RNA نمونه استخراج شد و آلودگی احتمالی DNA با استفاده از آنزیم DNase-RNase free حذف گردید و به دنبال آن cDNA ساخته شد. با استفاده از cDNAهای به دست آمده و پرایمرهای اختصاصی طراحی شده واکنش PCR انجام شد. الکتروفورز محصولات نهایی واکنش RT-PCR، نشانگر تکثیر قطعه مورد انتظار مربوط به cDNA گیرنده عملکردی لپتین (Ob-Rb) در بافت کبد گوسفند بود. ژن بتا اکتین نیز به عنوان کنترل مثبت داخلی مورد استفاده قرار گرفت و با توجه به اینکه پرایمر این ژن بر روی دو اگزون طراحی شده بود لذا تنها بیان قطعه مربوط به cDNA (و نه قطعه DNA) بیانگر هم درستی واکنش ها و هم تایید عدم آلودگی به DNA بود. لذا نتایج این مطالعه مشخص نمود بافت کبد که به عنوان یک اندام مهم دخیل در متابولیسم بدن می باشد یکی از بافت های هدف لپتین است و این نکته بایستی در مطالعات پایه ای و کاربردی مرتبط با لپتین در گوسفند مدنظر قرار گیرد.

کلمات کلیدی