استفاده مکرر و بیش از حد آنتیبیوتیکها موجب مقاومت باکتریهای بیماریزا نسبت به انواع آنتیبیوتیکهای رایج گردیده است. با توجه به این مسئله، محققان به دنبال روشهای جدیدی برای جایگزین کردن آنتیبیوتیکها میباشند که میتوان به پپتید- های ضدمیکروبی )AMP )اشاره کرد. لذا، هدف از مطالعه حاضر بررسی بیوانفورماتیکی اثر افزودن taq his بر فعالیت ضدباکتریایی پپتید بتادفنسین گیاهی و همسانهسازی ژن کدکننده آن در ناقل بیانی 1653pAMJ در باکتری الکتوکوکوس- الکتیس است. ساختار سوم پپتید بتادفنسین همراه با taq-his از طریق TASSER-I پیشبینی شد و توسط نرم افزارهای 6 SAVE و prosA صحت سنجی گردید. در نهایت داکینگ مولکولی از طریق نرم افزار Cluspro بین بتا دفنسین با و بدون توالی taq-his با آنتیژن LPTD باکتری اشرشیاکالی انجام شد. در بخش آزمایشگاهی، ژن بتادفنسین همراه با توالی his-taq و سیگنال ترشحی در ناقل تکثیری -pGEM DFF و میزبان تکثیری α5DH مورد استفاده قرار گرفت. پس از استخراج پالسمید و هضم آنزیمی توسط آنزیمهای 1Sap و1Sal ژن بتادفنسین گیاهی به داخل ناقل بیانی 1653pAMJ همسانهسازی گردید و با استفاده از روش الکتروپویشن به داخل باکتری الکتوکوکوس الکتیس سویه 1543 انتقال یافت. کلونیهای مثبت حاوی ناقل نوترکیب با روش کلونی PCR بررسی و در نهایت هضم آنزیمی صورت گرفت. در بخش بیوانفورماتیک، ساختار سوم ساختار با صحت قابل قبولی پیشبینی شد. نتایج داکینگ نشان داد پپتید بتادفنسین با و بدون taq-his به آنتیژن LPTD در موقعیت مناسب در تماس است. در بخش آزمایشگاهی نشان داده شد که ژن کد کننده بتا دفنسین گیاهی با موفقیت در ناقل بیانی 1653pAMJ همسانهسازی شد.

کلمات کلیدی